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熒光定量PCR儀常見的故障解決方法有哪些

點擊次數：524 更新時間：2023-02-22

　　熒光定量PCR儀是一種利用熒光技術實現核酸分子擴增的儀器，其工作原理可概括為：

　　1）檢測DNA樣本：根據實驗要求，將DNA樣本加入實驗支架，并置于定溫的PCR儀中進行處理。

　　2）擴增DNA：進行PCR循環，即把該DNA樣本通過反轉錄酶（RT）從核酸狀態變成具有特定基因序列的DNA鏈。

　　3）檢測基因序列：利用特定的含有熒光探針的PCR擴增產物，熒光探針是一種特定結合到特定基因序列上的分子標記，在接觸能夠激發熒光的激發劑時，能夠發出熒光信號。

　　4）計算DNA濃度：通過檢測得到的熒光值可以計算出該DNA樣本的濃度。

　　熒光定量PCR儀常見的故障解決方法有哪些：

　　1、探頭檢測不準確。當定量PCR儀檢測到探頭信號不準確時，可以嘗試使用不同的探頭，或者更換探頭（適當減少擴增溫度也是一種可能性），以確保精確分析結果。

　　2、儀器讀取不準確。當定量PCR儀讀取數據出現異常時，可以檢查儀器設置，例如查看相關的靈敏度調節參數并調整儀器設置，確保讀取正確的值。

　　3、無法正確識別反應曲線。在定量PCR實驗結束后，反應曲線可能會變得不太明顯，此時可以嘗試使用不同的PCR反應體系，比如改變反應溫度或使用更高的模板濃度，也可以更換酶以獲得較好的反應曲線。

　　4、圖形異常。若定量PCR圖形出現異常，則可能是工作液不夠穩定或有其它問題，需要重新校準儀器。

　　5、反應期產物剩余多。如果發現反應期產物剩余過多，則需要檢查儀器設置，確保溫度設置正確。

　　6、實驗反應效率低。在實驗中可能會發現反應效率較低，這種情況下可能是由于反應溫度過高或過低，使產物的活性降低，此時可以嘗試使用適當的溫度、模板濃度或酶類型來提高反應效率，以便獲得較好的結果。